Группа исследователей Харбинского ветеринарного научно-исследовательского института, входящего в состав Китайской академии сельскохозяйственных наук, разработала портативную систему для оперативного обнаружения вируса эпизоотической геморрагической болезни (EHDV). Технология объединяет метод изотермической амплификации RT-ERA и возможности системы CRISPR-Cas12a. Новая разработка позволяет проводить диагностику непосредственно в местах содержания животных, обеспечивая высокую точность без использования сложного лабораторного оборудования.
Эпизоотическая геморрагическая болезнь – это трансмиссивное заболевание, поражающее как диких, так и домашних жвачных животных. Инфекция передается через укусы мокрецов рода Culicoides, что создает серьезные риски для здоровья поголовья и продуктивности аграрного сектора. В условиях быстрого роста животноводства в Китае раннее выявление очагов EHDV приобретает критическое значение. До недавнего времени отсутствие портативных инструментов сдерживало меры оперативного реагирования, что приводило к риску масштабных эпизоотий и финансовым потерям.
Система, созданная под руководством профессора Ци Инлиня, использует механизм специфического расщепления нуклеиновых кислот. После предварительного усиления генетического материала вируса с помощью RT-ERA система CRISPR-Cas12a распознает РНК возбудителя. Результат анализа отображается в виде визуального сигнала – изменения цвета или флуоресценции, который легко интерпретируется специалистами на местах без специальной технической подготовки.
Традиционные методы идентификации EHDV, признанные Всемирной организацией по охране здоровья животных, включают выделение вируса на куриных эмбрионах или в клеточных культурах с последующим подтверждением тестами ИФА. Такие процедуры требуют значительных временных затрат, дорогостоящих реагентов и участия высококвалифицированного персонала. Новая платформа на базе CRISPR сокращает время получения результата до одного часа. При этом она сопоставима по чувствительности с классическим ПЦР-тестом в реальном времени, но не требует применения дорогих термоциклеров.
Разработка способна распознавать все восемь основных серотипов вируса EHDV. Это стало возможным благодаря проектированию специальных направляющих РНК, нацеленных на консервативные участки генома. Дополнительным преимуществом является совместимость теста с необработанными биологическими образцами. Использование метода HUDSON – термической обработки проб для нейтрализации нуклеаз – позволяет проводить анализ крови или гомогенатов тканей без сложной процедуры выделения вирусной РНК.
Внедрение децентрализованной диагностики упрощает эпидемиологический надзор в условиях ограниченных ресурсов, где доступ к центральным лабораториям может быть затруднен. Оперативное выявление вируса позволяет ветеринарным службам немедленно вводить карантин и приступать к локализации очага, защищая благополучие животных и экономическую стабильность отрасли. В дальнейшем авторы проекта планируют адаптировать платформу для одновременного типирования нескольких штаммов вируса в рамках одного цикла анализа.